Microbiología, tinción

Microbiología, tinción gy mamutairc 1 110R5pR 16, 2011 4 pagcs Practica 3: PREPARACIONES MICROSCÓPICAS Y OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO OPTICO 1. Realiza un diagrama de flujo de la tinción simple • A partir de una colonia • A partir de una suspenslón de mo en un medio liquldo. 2. Explica la finalidad de las etapas que se siguen al realizar un frotis bacteriano (extensión, secado y puede fijar sin utilizar calor? ¿Qué se utiliza en este caso? ¿Para qué está indicado? El objetivo de la Extensión es obtener sobre el portaobjetos una película fina y homo énea de la muestra.

Preparando el Swp to page portaobjetos, bien II ra y eliminando restos c et rotulador, y extendie o la m Con el secado o dese quedando una pelícu con detergente el M. O. con un bre portaobjetos. gua de la muetra etos. La fijación es el proceso que mata al microorganismo, coagula las proteínas bacterianas , inactiva los enzimas y fija las estructuras internas y externas de las células para que no cambien durante la tinción ni la observación. La fijación es necesaria para evitar que se pierdan las células durante la tinción al ser arrastradas por el colorante y/o los reactivos.

Podemos realizar la fijación bien con calor, o bien con fijadores qumlcos. Con la fijación química utilizamos compuestos volátiles como: metan metanol, etanol, etanol-acetona, etanol-éter sulfúrico, formaldehido, glutaraldehido o ácido acético. Estos fijadores químicos penetran en las células e inactivan componentes celulares como proteínas y lípidos. Con este tipo de fijación protegemos la estructura fina y la morfología de los M. O. delicados de mayor tamaño. 3. Señala las ventajas y desventajas de la tinción simple respecto del examen en fresco.

Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. inconveniente de la observación en fresco es que no permite umentar el contraste de la preparación. por tanto, su uso, con un microscopio óptico de campo claro, está bastante limitado. Las técnicas de tinción, en general, matan los microorganismos y no permiten apreciar la morfología de la célula viva. Sin embargo, teñir las células permite diferenciar bien estructuras y caracteres morfológicos, así como conservar las preparaciones en el tiempo. 4.

La coloración de las bacterias tiene como fines: Diferenciar bien estructuras y caracteres morfológicos, así como conservar las preparaciones en el tiempo. Aumentar el contraste de la preparación. Hay varios tipos de tinción: Tinciones Simples: para observar caracteres morfológicos y de agrupacion. Tinciones Diferenciales: para diferenciar microorganismos según su afinidad por el colorante. Tinciones estructurales: para observar estructuras celulares específicas. 5. ¿Por qué lo especificas. 5. ¿por qué los colorantes básicos son más utilizados en tinciones bacterianas que los ácidos? ?Qué se entiende por ión cromóforo? Los colorantes básicos son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion cargado positivamente, mientras que en los ácidos, el colorante es el ion cargado negativamente Los colorantes más utilizados son los de tipo básico, ya que la mayor parte de las células microbianas poseen cargas débilmente negativas en su superficie, lo cual facilita su unión. Los colorantes son sales con un ión positivo y otro negativo. Uno de los iones da color y se denomina cromóforo.

Según el tipo de ión que colorea la célula, los clasificamos en: Colorantes básicos o cationicos, el ión cromóforo tiene carga positiva (es un catión). Penetran en la célula bacteriana porque a pH- 7,0 la mayoría de bacterias tienen carga ligeramente negativa y atraen al catión cromóforo del colorante. Colorantes ácidos o anionicos, el ion cromóforo tiene carga negativa (es un anión). El anión cromóforo del colorante es repelido por la superficie bacteriana cargada negativamente, no penetra en las células pero colorea el fondo de la preparaclón. . ¿por qué es importante el tiempo en los métodos de tinción? Los tiempos de actuación de cada colorante están previamente calibrados para saber el tiempo de actuación necesario de cada uno de los coloran 3Lvf4 previamente calibrados para saber el tiempo de actuación necesario de cada uno de los colorantes que utilizamos. Es el iempo que le cuesta al colorante teñir la muestra, y cumpliendo estos tiempos tendremos la seguridad de que la muestra estará teñida correctamente.

Cada colorante varía su tiempo de aplicación sobre la muestra. 7. Busca microfotografías en internet de estreptococos, estafilococos, micrococos, sarcinas y bacilos. Estreptococos Estafilococos Micrococos Sarclnas Bacilos 8. ¿Qué ventajas tiene la tinción negativa respecto a la tinción simple? ¿Por qué la bacteria permanece sin teñir? ¿Por qué no se debe fijar la suspensión antes de teñir? No es necesario realizar un frotis de la muestra, y el colorante se plica por extensión en toda la superficie del portaobjetos.

La tinción negativa es útil para la observación de la morfología externa y el tamaño de las células, porque resultan muy visibles al contrastar con el fondo oscuro y porque, al no hacer frotis, la distorsión del tamaño y morfología celulares son mínimas. Las células permanecen sin teñir debido a la carga negativa del anión cromóforo del colorante, ya que este es repelido por la superficie bacteriana que esta cargada negativamente. Esto hace que no penetre en las células pero coloree el fondo de la preparación.